Procedimiento
1. CONFECCIÓN DEL FROTIS PARA COLOREAR:
A) Si el cultivo es sólido, disuelva la bacteria en una gota de solución salina utilizada como diluyente. realice el extendido con poca muestra y fijarlo con calor o por medio de etanol
B) Si el cultivo es liquido, no necesita utilizar diluyente. Agite el cultivo y deposite una gota en la lamina portaobjeto y extiéndala en la lamina portaobjeto.
C) Deje secar los extendidos a temperatura ambiente, luego fíjelos por medio del calor: esto se hace pasando la lamina seca dos a tres veces por encima de la llama del mechero. No exceda en la fijación, ya que el calor daña la pared celular de las bacterias y por lo tanto se altera la forma, la agrupación y la reacción tintorial al gram.
2. COLORACIÓN DE GRAM:
- Cristal violeta: 1 minuto
- Lugol: 1 minuto
- Alcohol acetona: 30 segundos
- Safranina o fascina: 1 minuto
3. Seque a temperatura ambiente y visualice con objetivo de inmersión (100x), y con una gota de aceite de inmersión.
4. Visualice y reporte en la siguiente tabla, la morfología, agrupación y la reacción tintorial al Gram de todas las bacterias observadas: recuerde que las bacterias grampositivas se observaran moradas o azules y las Gram negativas rosadas:
Bacteria | Morfología | Agrupación | Reacción tintorial al Gram |
ESTAFILOCOCOS | |||
ESTREPTOCOCOS | |||
BACILLUS | |||
CORYNEBACTERIUM | |||
E. COLI | |||
KLEBSIELLA | |||
MICROCOCCUS |
Palabras clave: Grampositivas, gramnegativas, gramvariables, extendido o frotis.