Procedimiento
1. Confección del frotis:
a) Extendidos a partir de faringe, sarro dental y vagina:
Con un escobillón estéril tome muestras y realice el extendido de forma circular siempre de adentro hacia afuera en una sola dirección esto para no dañar la morfología y agrupación bacteriana. No utilice diluyente ya que estas partes normalmente son húmedas
b) Extendidos a partir de materia fecal: dado que las heces son de consistencia dura o pastosa es necesario diluir la muestra con una gota de solución salina: recuerde no coger mucha muestra, pues el extendido quedara muy grueso y no podrá ver nada. Cuando la muestra es liquida no se debe usar solución salina como diluyente
c) Extendidos a partir de muestras de esputo: este no es necesario diluirlo con solución salina: con el palo de un escobillón estéril o un pedazo de baja lengua, coja suficiente muestra de la parte más purulenta o mucosa (recuerde que no puede estar contaminado con saliva del paciente) y extienda de manera horizontal la muestra sobre toda la lamina.
d) Extendidos a partir de secreciones de oído: deposite una gota de solución salina en la lamina portaobjeto. Con el escobillon estéril tome la muestra y emulsiónela con la solución salina de la lamina realizando el extendido de forma circular y de adentro hacia afuera para no dañar la morfología y agrupación de las bacterias presentes en esta muestra.
e) Extendidos con muestras liquidas no necesitan diluirse con solución salina, se realizan directamente con la muestra liquida
2. Coloración de Gram: una vez realizados los extendidos, déjelos secar a temperatura ambiente, fíjelos por calor y proceda a colorearlos:
- Cristal violeta: 1 minuto
- Lugol: 1 minuto
- Alcohol acetona: 30 segundos
- Safranina o fascina de Gram: 1 minuto
Deje secar a temperatura ambiente. Deposite una gota de aceite de inmersión y visualice con objetivo de inmersión (100x)
3. Observe y reporte las diferentes morfologías y agrupaciones bacterianas. Recuerde que si observa cedulas epiteliales, polimorfo nucleares neutrófilos (PMN) y blastoconidias debe dibujarlos y reportarlos.
INFORME DE RESULTADOS
- De cada muestra coloreada reporte la morfología agrupación y reacción tintorial al Gram de los microorganismos observados. Recuerde dibujar la morfología de las células epiteliales, los polimorfo nucleares neutrófilos (PMN) y blastoconidias y hacer el reporte completo de los mismos, siguiendo los parámetros entregados por la docente los cuales ya están estandarizados a nivel nacional.
- Analice cual fue la morfología y agrupación bacteriana mas predominante en las muestras observadas
RECUERDA QUE:
- Cuando el extendido y la coloración de Gram están bien hechos, el fondo de la placa, los polimorfo nucleares neutrófilos (PMN) y las células epiteliales deben quedar rosados
- No se deben observar células superpuestas, es decir unas encima de las otras
REPORTE DE RESULTADOS
MUESTRA | Morfología y agrupaciones | Reacción tintorial al gram | PMN | Blastoconidina |
Vagina |
||||
Materia fecal |
||||
Faringe |
||||
Sarro dental |
||||
Oído |
||||
Esputo |
Etapas en la tinción de gram
Palabras Clave: polimorfo nucleares neutrófilos (PMN), células epiteliales, blastoconidias.