Introducción
Para realizar un diagnostico microbiológico siempre se debe trabajar con *cultivos puros o axénicos* esto es que el cultivo tenga solo un microorganismo. Un Gram siempre se debe realizar a partir de cultivos que tengan 18-24 horas de incubación, pues de lo contrario se pueden alterar las pruebas bioquímicas para la identificación de los mismos y obtener los famosos Gram variables, esto es Gram de de difícil interpretación ya que las células observadas a partir de cultivos puros se verán grampositivas y gramnegativas al mismo tiempo y no se pueden reportar.
Por otro lado, la coloración de Ziehl Nielsen es utilizada en los laboratorios de microbiología para visualizar bacterias acido alcohol resistentes (B.A.A.R) como son el Mycobacterium tuberculosis y el Mycobacterium leprae, agentes infecciosos causantes de la tuberculosis y de la lepra.