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Procedimiento

Coloración  de  Z. Nielsen:

1. Con  el  palo  de  un  escobillon  o  el  pedazo de un baja lenguas,  realice  el  extendido   en  forma  lineal  de  la  parte  más    purulenta  o  sanguinolenta  del  esputo (recuerde  que  este  no  debe  estar  contaminado  con  saliva)

2. Deje  secar a temperatura  ambiente, fije  por  medio  del  calor

3.   Proceda  a  colorear  con  la coloración  de  Z. Nielsen:

  • Cubra  la lamina  con  abundante  fuscina  fenicada  de  Z. Nielsen
  • Caliente  cada  minute  con  el  mechero  hasta  que  vea  emisión  de vapores durante  5-10  minutos. No  deje  hervir. Si  se  seca  el  colorante  échele  mas  colorante  a la  preparación
  • Lave  con  abundante  agua
  • Cubra  con  alcohol  ácido, y  deje  el  tiempo  necesario  hasta  que  la  lamina  quede  totalmente  decolorada: transparente
  • Lave  con  agua
  • Cubra  con  azul  de metileno  por  2  minutos
  • Lave  con  agua. Deje  secar   a temperatura  ambiente  y mire  con  objetivo  de  inmersión (100x).

Etapas  en  la  coloración de  Z. nielsen

4. Búsqueda  y  visualización de las  bacterias  acido  alcohol resistentes (BAAR) se  observa  como  bacilos  muy  pequeños  de  color  rojo.

Reporte  de  resultados para la coloración de Ziehl Nielsen:

(-): No  se  observan  bacilos acido alcohol resistentes en  100 campos  microscópicos   observados,  ni  en  10  minutos  de observación.

(+): Se observan menos  de un  bacilo acido alcohol resistente por campo, en 100 campos Microscópicos observados     

(++): Se observan de 1 - 10   bacilos acido alcohol resistentes  por  campo,  en  50 campos (+++): Se observan  más de  10  bacilos acido alcohol resistentes por  campo, en  20   Campos microscópicos  observados.

Técnica  del  KOH al  3%:

  1. deposite  una  gota  de KOH  al 3% en  la  lamina  porta  objeto, y  con  el  asa  redonda  agarre  2-3   colonias  grandes de  las bacterias  entregadas  por  la  docente  .
  2. emulsione  y revuelva muy  bien por  espacio  de 30  segundos  a  un  minuto y  levante  el  asa de  la  lamina:  la presencia  de un  hilo  mucoide  dice  que  el  microorganismo  es  gramnegativo. Si  no  se  observa  hilo  mucoide   sugiere  que  el  microorganismo  es  grampositivo.

REPORTE DE RESULTADOS

Bacteria

Presencia de hilo

mucoide

No presencia de hilo 

mucoide

KLEBSIELLA

STAPHYLOCOCCUS AUREUS

RECUERDA  QUE: Las bacterias Gramvariables  nunca  se  observan  a  partir  de    secreciones  corporales (in vivo), solo  se  observan  a  partir  de  cultivos  puros  o  axenicos (in Vitro).

Precauciones para  evitar obtener una bacteria Gramvariable:

  • No  utilizar  laminas  sucias  ni  engrasadas
  • No  realice  extendidos  muy  gruesos  ni  muy  delgados
  • No  sobrecalentar  al  fijar  por  calor
  • No  lave  excesivamente  durante  la  coloración.
  • Realice el  Gram a  partir  de  cultivos  que  tengan 18-24  horas  de  incubación.
  • Hágale  control  de  calidad  a  la  coloración   para  verificar  que  esta  está  funcionando  correctamente.